Abstrak

Pretrombin-2 adalah prekursor trombin yang berperan mengubah fibrinogen menjadi fibrin untuk proses penutupan luka. Bahan ini dapat diterapkan sebagai pengganti teknik jahitan pasca bedah mata. Pada penelitian sebelumnya dilaporkan bahwa ekspresi pretrombin-2 manusia rekombinan dalam inang Escherichia coli selalu menghasilkan badan inklusi. Namun, kami berhasil mengekspresikan pretrombin-2 manusia pada E. coli dalam bentuk protein larut. Optimasi kodon gen target sesuai kodon preferensi inang, perancangan gen target terfusi intein dalam vektor ekspresi pTWIN1, dan penggunaan galur E. coli BL21 (DE3) ArcticExpress yang mengandung chaperon, menjadi penunjang keberhasilan ekspresi pretrombin-2 manusia dalam E. coli. Penelitian ini bertujuan untuk memurnikan fusi pretrombin-2 dari penanda intein hasil ekspresi E. coli menggunakan kolom matriks kitin. Fusi pretrombin-2 berhasil dimurnikan menggunakan matriks kitin yang dimediasi intein. Walaupun begitu, pemotongan fusi pretrombin-2 dari penanda intein belum sempurna dan masih diperlukan optimasi lebih lanjut. Sistem pemurnian dimediasi intein menjadi menarik, karena protein diperoleh dengan satu tahap pemurnian, mampu melakukan pemotongan sendiri (self-splicing), dan pemotongan protein dari penanda intein dapat dilakukan menggunakan penambahan senyawa tiol atau dengan induksi perubahan pH/suhu.

Kata kunci: pretrombin-2; trombin rekombinan; lem fibrin; E. coli ArcticExpress; pemurnian dimediasi intein